科研产出
转基因玉米ND207转化事件特异性定性PCR检测方法及其标准化
《作物学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：转基因玉米ND207是中国农业大学研发的转mCry1Ab和mCry2Ab基因的抗虫玉米,本研究的目的是建立ND207转化事件特异性定性PCR检测方法。根据研发者提供的引物进行PCR扩增,PCR产物测序分析,获得了5’端旁侧序列262 bp,包括109 bp的载体序列和153 bp的玉米基因组序列, 3’端旁侧序列316 bp,包括76 bp的载体序列和240bp的玉米基因组序列。针对两端旁侧序列设计14条引物,组成25对引物组合进行引物筛选,选中3’端一对最佳引物优化PCR反应体系及反应条件,建立ND207的转化事件特异性定性PCR检测方法, PCR产物片段大小为166 bp。经过测试,该方法的检出限为0.1%,相当于20个拷贝的ND207特异分子片段。国内8家转基因生物安全检测机构对本方法进行了特异性测试、检出限测试和再现性测试,循环验证报告显示:该方法符合国家标准方法的各项要求,可在检测行业推广应用。ND207转化事件特异性定性PCR检测方法的建立,为我国ND207及其衍生品系的安全监管提供技术支撑。
关键词： 转基因玉米 ND207 旁侧序列 转化事件特异性 定性PCR
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芽苗菜中蜡样芽孢杆菌的污染研究
《农产品质量与安全 》 2021
摘要：为了控制芽苗菜工厂化生产中蜡样芽孢杆菌的源头污染,实验采用人工污染芽苗菜种子的方式,对芽苗菜生长、收获、储藏等环节进行蜡样芽孢杆菌变化的全程控制;采用电子扫描显微镜对蜡样芽孢杆菌的附着、内化进行观察;采用基质解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对蜡样芽孢杆菌进行定性鉴定;利用Baranyi Roberts模型建立芽苗菜储藏过程中蜡样芽孢杆菌生长一级模型,并拟合不同温度下生长曲线。实验结果表明,25.3%的芽苗菜不同程度地受到蜡样芽孢杆菌污染,其中8%的阳性样品污染量大于3 logCFU/g,具有食用安全风险;电镜观察发现,蜡样芽孢杆菌污染可内化到种皮内部;伴随芽苗菜生长,蜡样芽孢杆菌的污染在90 h后有2 logCFU/g左右的衰减,但在收割后蜡样芽孢杆菌增长量会超过4.5 logCFU/g。分别在4℃、 15℃、 20℃、 25℃、 35℃贮藏时,蜡样芽孢杆菌会随着贮藏温度及贮藏时间的变化而变化,符合微生物生物特征。芽苗菜具有蜡样芽孢杆菌污染的高风险,从种子就可带入污染,随着芽苗菜生产过程的推进,蜡样芽孢杆菌的数量会先降低再升高,收割后细菌污染会加重,低温保藏可有效控制污染程度。本研究结果为芽苗菜生产过程中的微生物控制建立基础,对其食用风险防控有积极意义。
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两种配方废弃菌棒堆肥中微生物多样性研究
《农业机械学报 》 2019 EI 北大核心 CSCD
摘要：以废弃菌棒为主要原料,添加牛粪和草炭,进行堆肥发酵,取腐熟完成后的2种肥料样品DNA,采用16SrDNA V3+V4区和ITS2高通量测序方法,研究不同配方粗制肥料中微生物多样性和群落结构的差异。结果表明,"牛粪+菌棒"制得的有机肥生物多样性高于"草炭+菌棒",且真菌差异大于细菌;"牛粪+菌棒"有机肥相对"草炭+菌棒"有机肥具有10个优势细菌属和6个真菌属,"草炭+菌棒"有机肥相对"牛粪+菌棒"有机肥具有14个优势细菌属和4个真菌属。两种配方堆肥制得的有机肥微生物群落结构无显著性差异。研究发现了多种具有农业价值的功能菌,可为功能性微生物的开发利用提供科学依据。此外,也发现一些潜在危害因子,如黄曲霉和杂色曲霉亚种在"牛粪+菌棒"有机肥中丰度较高,产生的黄曲霉毒素、杂曲霉毒素易造成农作物污染。
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从蔬菜中回收细菌的前处理方法研究
《食品安全质量检测学报 》 2019
摘要：目的结合细菌的回收效果,探究生菜和黄瓜微生物检测的最佳样品前处理方法。方法以生菜和黄瓜为研究对象,通过电镜观察细菌在经过样品处理后蔬菜中的附着与内化,结合细菌回收实验设计3种前处理方法,分别是不同取样量,不同取样部位和不同稀释方法,采用SPSS软件对3种处理下细菌的回收结果进行差异性分析。结果实验设计的3种方法对细菌的回收效果差异显著(P<0.05)。黄瓜和生菜中微生物检测样品前处理方法选取50g取样量,并采用匀浆的方式最有效地回收细菌,取样部位如果考虑将食用风险最大化,建议选择表面取样,如果需考虑整体污染水平,建议对样品表面及内部进行整体取样。结论改进后的新鲜果蔬前处理方法能更有效地回收到果蔬样品中的细菌,对制订相关检测标准或是开展果蔬微生物研究样品前处理方法提供了有效建议。
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蜡样芽孢杆菌在草莓中的生长及预测模型的建立
《现代食品科技 》 2019 北大核心
摘要：在对草莓的病源微生物污染调查中发现蜡样芽孢杆菌具有高的检出率.为比较不同温度和不同包装方式的草莓表面蜡样芽孢杆菌数量的变化情况,测定了7℃、15℃、25℃、30℃的温度条件下,采用保鲜盒包装和保鲜膜包装方式的草莓表面蜡样芽孢杆菌生长数据;选用Baranyi Roberts模型为初级模型,拟合不同温度和不同包装方式的草莓中蜡样芽孢杆菌生长曲线,并对模型进行验证.结果显示,7℃冷藏的蜡样芽孢杆菌均增长缓慢而与包装方式无关;15℃低温贮藏过程中,膜装与盒装延滞期基本相同,但膜装比盒装降低了0.7 lg cfu/g的生长势,说明保鲜膜在此温度下有一定的抑菌作用;在25℃、30℃储藏下两种包装方式的比生长速率和延滞期基本相同,蜡样芽孢杆菌在42 h后分别增长了2.9 lg cfu/g、3.2 lg cfu/g,表明贮藏温度是影响蜡样芽孢杆菌的主要因素.因此在高温条件下蜡样芽孢杆菌会带来潜在的食用安全风险.本研究结果为微生物定量风险评估提供重要信息.
关键词： 草莓 蜡样芽孢杆菌 基质解吸电离飞行时间质谱 微生物生长预测模型 模型验证
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基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法分析天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌
《食品安全质量检测学报 》 2019
摘要：目的探索基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)在牦牛酸奶中德氏乳杆菌检测中的应用。方法采用MALDI-TOF MS对分离自天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌进行分析研究。针对10株分离自牦牛酸奶经16S rDNA鉴定的德氏乳杆菌进行质谱分析,根据乳酸菌的特异性特征,设计6种微生物破碎方法和5种微生物蛋白质抽提方法进行正交组合实验,在同一质谱条件下采用加权计算及均方根误差分析的获得变异较低稳定性高的处理方法。在最佳处理组合下采用SARAMIS Premium对德氏乳杆菌进行相关分析。结果实验结果表明在液氮、超声、甲酸处理下德氏乳杆菌在基质解析电离中可产生稳定且丰富的蛋白质峰组,且相关分析较离散,但实验结果可为菌种差异性分析提供理论帮助。结论 MALDI-TOFMS对天然牦牛酸奶中德氏乳杆菌特征性分析具有较强应用价值。
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法 德氏乳杆菌 牦牛酸奶 乳酸菌 标识峰
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MALDI-TOF MS对草莓中铜绿假单胞菌和黏质沙雷氏菌的检测
《食品科学技术学报 》 2018
摘要：为了评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)在草莓微生物风险监测的应用价值,确定草莓的危害识别微生物及其特征,采用选择性培养方法对50份草莓样品中铜绿假单胞菌和黏质沙雷氏菌进行分离,MALDI-TOF MS对分离微生物进行鉴定,应用SARAMIS Premium软件对这2种食物感梁性病原微生物的蛋白质图谱进行分析和加权修正。结果表明,铜绿假单胞菌在草莓中的检出率为18%,黏质沙雷氏菌检出率为20%,实验获得草莓中分离铜绿假单胞菌完全拟合特征峰12组,标识峰聚类分析结果表明,分离铜绿假单胞菌差异较大;获得草莓分离黏质沙雷氏菌完全拟合特征峰有8组,标识峰加权聚类分析结果可认定分离的2株黏质沙雷氏菌同源。MALDI-TOF MS方法可标识草莓分离微生物的蛋白质特异性特征,且对微生物的溯源及特异性分析有一定优势,表明其在农产品复杂微生物环境中具有应用潜力。
关键词： MALDI-TOF MS 草莓 铜绿假单胞菌 黏质沙雷氏菌 标识峰
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重金属污染土壤微生物的分离与研究
《山西农业科学 》 2018
摘要：为了解重金属污染土壤中微生物的群落状况,摸索土壤微生物改良方法,试验对不锈钢厂排污口周边土壤中的铅(Pb)、铬(Cr)、镍(Ni)、铜(Cu)、铁(Fe)、锌(Zn)采用火焰原子吸收光谱法进行检测,针对土壤重金属含量设计选择培养基进行微生物分离,然后采用基质解析飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法对分离的微生物进行鉴定,并在重金属培养基中采用数学方法建立生长模型。结果表明,不锈钢厂污水污泥中Fe含量高达2.0×10~5 mg/kg,Cr含量也达到4.7×10~4 mg/kg。采用高Fe培养基在污染土壤中筛选到1株微生物,经质谱鉴定为希瓦氏菌;在高Cr培养基中筛选到1株微生物,经鉴定为短小芽孢菌;2株微生物在高浓度重金属盐培养基中可耐受,但无重金属高营养培养基传代培养2代后重金属耐受能力消失。
关键词： 铁 铬 希瓦氏菌 短小芽孢菌 基质解析飞行时间质谱 Baranyi and Roberts模型
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